佑佰生物
uniBac
常見問題
COMMON PROBLEM
佑佰生物提供哪些蛋白表達系統？
佑佰生物通常能表達多少蛋白？項目周期是多久？
佑佰生物為什么要用這兩種昆蟲細胞來表達重組蛋白？
Sf9細胞和HighFive細胞適于貼壁培養還是懸浮培養？
從蛋白表達量方面評價，HighFive細胞一定比Sf9細胞更具優勢？
相比其他蛋白表達系統，昆蟲細胞桿狀病毒表達系統有什么優勢？哪些蛋白適合用這套系統來表達？
從蛋白活性方面評價，Sf9細胞和HighFive細胞相比誰更具優勢？
佑佰生物使用的qBac?表達系統有什么優勢？
佑佰生物采用哪些昆蟲細胞來表達重組蛋白？
佑佰生物如何培養上述兩種昆蟲細胞？
佑佰生物擁有獨家授權的qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，大多數蛋白的表達量不低于300mg/L，半數以上蛋白的表達量可以超過500mg/L，甚至有案例可超過5g/L。蛋白純化后的收率受諸多因素的影響，不同種類的蛋白具有不同的產量，我們的工程師會通過小試實驗，測算最終的蛋白產量。項目周期取決于目的蛋白的類型和交付標準，詳見<服務與訂購>。
佑佰生物擁有獨家授權的qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，提供昆蟲細胞桿狀病毒表達系統的定制蛋白服務。
Sf9細胞來源于草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵巢組織，廣泛用于包裝病毒（轉染）、生產高滴度病毒（感染）以及表達重組蛋白；HighFive細胞來源于粉紋夜蛾Trichoplusia ni的卵巢組織，但其轉染效率偏低（一般低于20%）故不適用于病毒包裝（轉染）。然而，HighFive細胞適于在無血清培養基中懸浮培養，往往在表達重組蛋白方面具有優越的性能，能夠大幅提高重組蛋白的表達量，尤其適合表達分泌性重組蛋白。
Sf9細胞用作轉染時，通常采用貼壁培養的方法。用于大量制備重組蛋白時，Sf9細胞和HighFive細胞均采用懸浮培養的方法，懸浮培養有利于快速進行營養交換和廢物代謝，從而獲得高密度的細胞懸液，進而獲得更多的重組蛋白。
大量的科研和工業實踐表明，在HighFive細胞中，重組蛋白通常能夠獲得更高的表達量。然而也有案例表明，某些蛋白在Sf9細胞中能夠獲得更高的產量，甚至有些重組蛋白只能在Sf9細胞中表達。所以，佑佰生物推薦您同時采用兩類細胞進行蛋白表達和純化的測試工作。
昆蟲細胞桿狀病毒表達系統獲得的重組蛋白，通常具有正確穩定的空間結構，能夠維持其自身的天然活性，具有廣泛的適用性。獲得的重組蛋白具有翻譯后修飾（糖基化類型與哺乳動物細胞稍有不同，主要體現在唾液酸化修飾），尤其適合表達酶或病毒蛋白。另外，昆蟲細胞桿狀病毒表達系統在表達大分子量蛋白和一些難表達蛋白時也能夠收獲可觀的表達量。
昆蟲細胞天然具有幫助蛋白折疊，促進蛋白維持具活性的空間結構的特性。目前尚未有明確的證據表明，兩種細胞表達出的重組蛋白在活性方面存在顯著差異。
佑佰生物擁有獨家授權的qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，qBac?是性能卓越的昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，能賦予重組蛋白極高的表達量并維持重組蛋白的天然活性。qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統的優勢詳見<主營業務>。
佑佰生物采用Sf9細胞（來源于草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵巢組織）和HighFive細胞（來源于粉紋夜蛾Trichoplusia ni的卵巢組織）開展技術服務，表達并制備重組蛋白。
（1）科學的培養條件：昆蟲細胞合適的孵育溫度為26-28℃，搖瓶轉速為110-150rpm以確保充足的氧氣供應，無需CO2交換；（2）嚴格的質量評價：通常從傳代次數（不超過30代）、形態觀察（昆蟲細胞直徑為15-18μm）、倍增時長（Sf9細胞為24-30h，HighFive細胞約為24h）和活性測定（臺盼藍染色測定細胞活性）等方面確保昆蟲細胞處于最佳狀態；（3）標準化的操作流程：佑佰生物建立了全套的標準化操作流程，確保各個環節（細胞培養、細胞傳代、細胞轉染、病毒包裝、滴度測定、蛋白檢測等）的標準化。佑佰生物通過以上三方面確保昆蟲細胞的狀態穩定，從而為客戶提供高質量的服務。
|
|