佑佰生物
uniBac
常見問題
COMMON PROBLEM
佑佰生物可以表達酶嗎？
佑佰生物表達的蛋白可以組裝成病毒樣顆粒 (Virus-likeParticles，VLP)嗎？
佑佰生物表達的蛋白具有翻譯后修飾（Post-translational modifications, PTMs)）嗎？存在糖基化修飾嗎？
佑佰生物提供哪些純化策略？親和層析中His標簽放在N端還是C端？
佑佰生物提供無標簽蛋白表達和純化的服務嗎？
佑佰生物如何測定蛋白濃度和純度？
佑佰生物是否接受客戶提供桿狀病毒的訂單？
佑佰生物提供其他的蛋白標簽用于重組蛋白表達和純化嗎？
佑佰生物可以表達大分子量蛋白嗎？
佑佰生物表達的蛋白一定可溶嗎？不可溶蛋白是否可以進行變性復性？
佑佰生物可以利用昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，同時表達多個重組蛋白嗎？
病毒樣顆粒(VLP)為病毒單一或多個結構蛋白自我組裝形成的高度結構化蛋白顆粒，VLP不含有病毒的遺傳物質且在形態結構上與天然病毒具有高度相似性，因此具有較高的安全性、較強的免疫原性、特異性及生物活性。VLP的組裝依賴蛋白自身的組裝，佑佰生物提供的技術服務中，較高的蛋白表達量能夠促進重組蛋白在胞內或培養基中發生自組裝，更大概率促進VLP結構的構筑。
qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統非常擅長酶的表達，通常表達出的酶具有天然的結構、有效的活性和極高的產量，適于各類下游應用場景。通常酶的純化過程在低溫下進行，還會添加蛋白酶抑制劑，以確保其蛋白活性和得率。
昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，能夠對表達出的蛋白進行翻譯后修飾（PTMs）。糖基化作為典型的翻譯后修飾類型，存在于重組蛋白中。然而，昆蟲細胞的糖基化和哺乳動物的糖基化稍有不同，主要體現在哺乳動物細胞合成的糖蛋白含有唾液酸末端的雜合型N－糖鏈，而昆蟲細胞表達的蛋白糖鏈僅包含數個寡糖類（甘露糖或海藻糖等），其形成的糖蛋白可能會導致過敏反應。對于解決昆蟲細胞糖基化修飾缺陷的問題，佑佰生物采用Mimic Sf9細胞，使制備出的糖蛋白具有更完整的N-糖基化途徑，在含有血清的培養液中能夠表達出人源化的重組糖蛋白。
目前，佑佰生物提供親和層析及離子交換純化策略。 親和層析中，His標簽因其分子量較小，后期純化便捷，低成本等特點被廣泛使用。His標簽的位置取決于重組蛋白的特性及下游應用需求，若蛋白大小適中且標簽不影響后續試驗，N端和C端均可；若目的蛋白較小，為延緩降解，通常建議放在C端；若后續需要切割標簽，為避免氨基酸殘基的切割不完全，通常建議放在N端。
佑佰生物采用的qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統能夠大量表達重組蛋白，若使用分泌策略，可于培養液上清中獲得較高純度的重組蛋白。然而并非所有蛋白均可以實現上述情況，故通常建議添加不影響蛋白功能的小標簽（His tag）便于后期蛋白純化。如客戶必須要求無標簽蛋白純化，佑佰生物可以提供離子交換的純化策略為客戶提供服務。
佑佰生物通常采用A280(nm)紫外光吸收法和BCA法來測定蛋白濃度，分析SDS-PAGE中蛋白條帶的灰度來測定蛋白純度。
佑佰生物擁有專利授權的qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統，提供昆蟲細胞桿狀病毒表達系統的定制蛋白服務。qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統具有卓越的性能，適于各類蛋白的表達和制備，而其他類型的桿狀病毒表達系統可能會導致不可預估的風險，故佑佰生物會在接受客戶提供桿狀病毒的此類訂單時，向客戶充分闡明其中的試驗風險。
具體需求請與我們的技術人員商議。
大分子量蛋白通常難以表達，在表達后也容易發生降解。但大量的科研和工業實踐表明：昆蟲細胞桿狀病毒表達非常適合表達大分子量蛋白。佑佰生物擁有豐富的大分子量蛋白的表達經驗，成熟的技術平臺能夠為客戶提供該項服務。
通常情況下，昆蟲細胞因其自身優勢，表達出的蛋白是可溶的，所以我們一般不對其進行變性復性操作。佑佰生物通常會在前期根據客戶需求，盡可能設計科學合理的方案來表達目的蛋白，通過審慎地進行密碼子優化、推薦性能卓越的信號肽和啟動子、設計合理的純化標簽、選取最優的表達方式等策略來進行重組蛋白的制備。理論上不可溶蛋白可以通過變性再復性過程提高可溶性，但佑佰生物通常不提供該項服務。
佑佰生物可以利用qBac?昆蟲細胞桿狀病毒表達系統同時表達多個蛋白。有以下策略可供選擇（1）多個蛋白的基因（CDS編碼區）分別整合到多個桿狀病毒基因組中，通過桿狀病毒的共感染，使昆蟲細胞同時表達多個重組蛋白；（2）將多個蛋白的基因整合到同一個桿狀病毒基因組中，通過桿狀病毒最強的兩個啟動子（polh promoter和p10 promoter）來調控目的蛋白的表達。這種策略通常用來同時表達兩個不同的重組蛋白；（3）采用更加精巧復雜的策略，確保多個蛋白的基因整合到同一個桿狀病毒基因組中，使得多個蛋白同時表達并維持其天然功能，詳情請見CRO業務。
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